MLPA​ – Amplificación de sondas tras ligación múltiple

Resumen del MLPA

Resultados e informes

Hay dos resultados posibles que pueden obtenerse con un test de MLPA:

• Presencia de una deleción, duplicación o alteraciones de metilación

La presencia de una deleción, duplicación o alteración de metilación de un gen o región indica que el resultado es compatible con el diagnóstico de la enfermedad o condición clínica estudiada.

Este resultado permite proporcionar asesoramiento genético y orientación sobre el manejo clínico de la enfermedad, pronóstico, la aplicación de medidas preventivas o terapéuticas y posibles implicaciones reproductivas o para otros miembros de la familia.

• Ausencia de una deleción, duplicación o alteraciones de metilación

La ausencia de una deleción, duplicación o alteración de la metilación indica que no se ha identificado la causa molecular de la enfermedad o condición. Este resultado no confirma ni descarta la indicación clínica de la prueba y no garantiza que el paciente pueda tener cualquier otro trastorno genético. Por esta razón, este resultado no elimina el riesgo de descendencia futura. En el caso de que se conozca la presencia de una alteración genética previa, un resultado negativo sí que descarta la presencia de esa variante genética en el paciente. Un resultado negativo puede explicarse por varias causas, como, por ejemplo, limitaciones en el conocimiento genético actual o derivadas de la metodología utilizada.

Requisitos de muestras

En los casos prenatales:

• Es altamente recomendable el contacto previo con el laboratorio y la planificación de los tiempos para evitar posibles incidencias con los plazos prenatales
• Se requiere muestra de sangre materna junto con las correspondientes muestras prenatales obtenidas mediante líquido amniótico, biopsia corial o restos fetales con el objetivo de descartar una posible contaminación de la muestra fetal con muestra materna
• Otras muestras familiares pueden ser solicitadas como controles positivos.
• Todos los casos prenatales son procesado con la máxima prioridad

Se requiere un adecuado etiquetado de los tubos con la información necesaria del paciente que permita su identificación inequívoca. Un etiquetado incorrecto puede implicar un rechazo de la muestra. La información mínima requerida para identificar y aceptar una muestra es: nombre completo del paciente, fecha de nacimiento, sexo y número de registro médico.

El formulario solicitud y el correspondiente consentimiento informado deben estar debidamente cumplimentados y firmados por el paciente y médico prescriptor.

Metodología

Limitaciones

El MLPA no permite detectar

• Reordenamientos cromosómicos equilibrados
• Deleciones y duplicaciones teloméricas
• Deleciones y duplicaciones que no estén incluidas en el diseño de las sondas de MLPA utilizadas
• Alteraciones de la secuencia de ADN como mutaciones puntuales, pequeñas deleciones e inserciones
• Expansiones o mutaciones en el ADN mitocondrial

La sensibilidad analítica y la especificidad del método MLPA son del 99%.

Pueden producirse falsos positivos o negativos debido a variantes raras de secuencia en las regiones detectadas por las sondas MLPA. Además, mutaciones puntuales o polimorfismos en esas secuencias pueden generar una reducción en el área relativa del pico. Por este motivo, las deleciones de un solo exón detectadas por MLPA siempre deben confirmarse mediante otros métodos como la PCR múltiple o la secuenciación.